培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件,
Gibco血清培養(yǎng)時該如何選對培養(yǎng)基呢?
一、合成培養(yǎng)基的配制
1.根據(jù)細(xì)胞目錄中的說明,按下表選擇合適品牌及貨號的培養(yǎng)基干粉,用適量超純水充分溶解。
2.按要求添加碳酸氫鈉、谷氨酸鈉、HEPES等,充分?jǐn)嚢枋怪芙狻?/div>
3.調(diào)pH至7.2左右。
4.加水至最終體積。
5.在超凈臺中對溶液進(jìn)行濾過除菌,分裝入250 mL或500 mL玻璃瓶中,用翻帽塞塞緊瓶口。
6.瓶口封好,4℃冰箱貯存。
二、生長培養(yǎng)基的配制
除無血清培養(yǎng)之外,各種合成培養(yǎng)基在使用前需加入一定量的血清和抗菌素。
培養(yǎng)基分裝成小瓶(100-200 mL)以便使用,翻帽塞塞緊瓶口。
按如下比例配制:基本培養(yǎng)基占80%-90%,血清占10%-20%。按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素),使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100μ/mL。
三、Gibco血清的處理
市場上出售的血清一般做了滅菌處理,但在使用前還應(yīng)做熱滅活處理,即通過加熱的方法破壞補(bǔ)體(近來也有觀點認(rèn)為熱滅活處理是不必要的)。
1.將血清加熱至56℃并保持30 min,其間要不時輕輕晃動,使受熱均勻,防止沉淀析出。
2.處理后的血清貯存于4℃。
3.血清在使用前最好進(jìn)行篩選以掌握血清的質(zhì)量。