發(fā)布時(shí)間: 2021-12-07 點(diǎn)擊次數(shù): 791次
ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法,也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。
對(duì)于ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)常出現(xiàn)的技術(shù)問題我們?nèi)绾握页龃鸢福?/div>
1.培養(yǎng)用液pH對(duì)細(xì)胞生長有何影響?
由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍對(duì)細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差,無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。總體來說,細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些,偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。因此在配制培養(yǎng)用液時(shí),可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時(shí),溶液的pH還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。
2.何為傳代培養(yǎng)?
在進(jìn)行傳代時(shí),如果是懸浮細(xì)胞,只需簡單稀釋即可,若需*更換培養(yǎng)液只需低速離心沉淀,再懸浮于合適的培養(yǎng)液中即可。一般細(xì)胞每毫升接種數(shù)量為5´104-8´105個(gè),傳代密度太低,細(xì)胞容易死亡,表現(xiàn)出細(xì)胞在達(dá)到增長前有較長的滯留期。在培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)液會(huì)由于pH下降而呈現(xiàn)黃色,表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到最大密度需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)。如果是單層貼壁的細(xì)胞,等長滿培養(yǎng)瓶表面,即可進(jìn)行傳代,多數(shù)細(xì)胞需用胰蛋白酶處理將細(xì)胞從生長物表面分離下來,以促進(jìn)傳代培養(yǎng)。
3.細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境有何要求?
?、贌o污染環(huán)境
培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí),與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等,可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中,保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時(shí)清除等,是維持細(xì)胞生存的基本條件。
②恒定的溫度
維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響,甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí),細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí),細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞全部死亡。
?、蹥怏w環(huán)境
氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。